BHK-21細胞的培養需要特定的條件以確保其健康生長：
培養基：通常使用含有10%胎牛血清（FBS）DMEM或RPMI-1640培養基。
溫度與氣體環境：維持在37℃，5% CO2的培養箱中。
傳代方法：當細胞密度達到80%-90%時，需進行傳代。具體步驟包括棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次，隨后加入消化液（如0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA）于37℃消化1-2分鐘，直至細胞大部分變圓并脫落，最后加入含10%血清的培養基終止消化，輕輕吹打細胞使其脫落，離心后重懸并分配至新的培養瓶中。
在成功傳代后，BHK-21細胞的生長狀態需密切觀察。通常，細胞在傳代后24小時內會重新貼壁，并在48-72小時內進入對數生長期。若細胞貼壁不良或生長緩慢，可能需檢查培養基成分是否失效，或培養箱的CO2濃度及濕度是否穩定。
對于長期培養的BHK-21細胞，建議定期檢測支原體污染，并避免頻繁更換培養基批次，以減少細胞適應性的波動。此外，凍存細胞時推薦使用含10% DMSO的凍存液，以緩慢降溫（如程序凍存盒）的方式保存于液氮中，確保細胞復蘇后的存活率。
在實驗應用中，BHK-21細胞常用于病毒增殖、重組蛋白表達等研究。為提高外源基因的轉染效率，可采用脂質體轉染或電穿孔法，但需優化條件以避免細胞毒性。若用于病毒包裝，需注意細胞密度控制在60%-70%，以確保感染效率。
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