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    細胞培養操作

    點擊次數:1023  更新時間:2024-06-24
    細胞系(cell line)指原代細胞培養物經首次傳代成功后所繁殖的細胞群體。 也指可長期連續傳代的培養細胞。(由此便引申出了后來的有限細胞系(FiniteCellLine)、無限細胞系(InfiniteCellLine)),因此,細胞系狹義的是指可連續傳代的細胞(特定環境下口語和書面語都使用),廣義是指可傳代的細胞。
    細胞傳代:
    a、棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
    b、加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,使消化液浸潤所有細胞,將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-2min(視細胞情況而定),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加2-3ml培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000rpm離心5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
    c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8mL培養基的新皿中或者瓶中,置于培養箱中培養。 
    細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;a、收集細胞及細胞培養液,裝入無菌離心管中,1000rpm條件下離心4min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進行細胞計數。
    b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱,24h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
    復蘇細胞:
    將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4mL培養基混合均勻。在1000rpm條件下離心3min,棄去上清液,加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8mL培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
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